亚细胞定位公司信息

亚细胞定位技术服务实验流程：

构建载体——测序验证成功后转大肠——扩增大肠——获得大量载体——pcr——构建表达载体——转化农、注射/转化拟南芥/原生质体——取样品共-观察。

亚细胞定技术位服务实验注意点：

1、有共定位要求的蛋白，客户提供蛋白定位预测结果，我们选择相应的marker载体进行共定位。如果观察结果和预测不一致，则应该是蛋白原因而不是观察原因。如果需要二次观察则另外收取样品观察费用。

2、实验结果：提供清晰的荧光图，明场图，merge图。

3、交付数据：数据图、质粒测序结果、质粒及大肠。

4、提供拟南芥、水稻、等原生质体。

5、marker种类：线粒体、叶绿体、细胞核定位、细胞膜定位、内质网

6、可以在实验后保留瞬时转染的叶片供后续检测。

1将融合基因待测植物蛋白质基因-报告基因-到植物表达载体，得到重组表达载体；2将重组表达载体转化农，得到重组农；3向重组农中加入农侵染缓冲液，调节od600为0.1～0.3，20-25℃静置1-2h，得到侵染菌液；糖酵解途径是体内-代谢主要的途径之一，也是糖、脂肪和-酸代谢相联系的途径。4用针头在植物叶片上避开叶脉扎孔，用无针头将侵染菌液从扎孔处注射至植物叶片内；5培养植物2天，从注射部位取1-2cm2叶片；根据报告-待测植物蛋白质在植物中的亚细胞定位。实验证明，本方法具操作简单、快速、标记效果好、重复性好的优点；还可用于基因表达调控及内含子功能研究等，对研究新基因功能和表达调控奠定了技术基础。

在一个细胞中，细胞器形成一个封闭的空间。在这个空间中发生的化学反应完成细胞中的特定功能。鉴于这些功能与一组特定的蛋白紧密地关联在一起，了解人蛋白质组的亚细胞定位是理解人细胞的功能和内在机制的关键知识。

通过对目的蛋白的标记，例如融合绿色荧光蛋白gfp，使用扫描共-显微镜激发荧光，从而对蛋白的表达分布予以确认。依据对亚细胞分布的准确度不同，亚细胞定位的实验设计也分成简化型亚细胞定位分析和内参型共定位分析。细胞爬片可以买专门的爬片一般直径14mm的小圆玻片正好适合24孔板的大小，在超净台中取出后用75%酒精浸泡5-10分钟，用镊子夹取后在酒精灯上过火后轻轻放入细胞板内放前可事先在孔内滴一滴生长液以避免玻片与细胞板之间出现气泡。对于植物蛋白的亚细胞定位分析，主要通过构建融合荧光蛋白的过表达质粒，转化烟1草和原生质体瞬时表达体系确定其定位及共定位情况。