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蛋白质亚细胞定位对研究蛋白质的功能非常重要。亚细胞定位要研究蛋白质的细胞定位,是在外面完成的一种实验,不能再体内蛋白质细胞中完成,所以,研究的成本比较高,对知识的要求比较高。如果用传统的电子显微法、荧光显微法等进行亚细胞定位,要耗费大量的人力物力。但是其实目前已经有非常多的软件和网站可以直接根据蛋白的序列,预测出所属的亚细胞位置。比如:targetp、subloc、wolfpsort等……
蛋白质亚细胞定位的工具现在已经很了,但是基本的理论近年来没有重大突破,预测结果也需要实验验证。3.生理意义糖酵解的生理意义在于迅速提供能量尤其对肌肉收缩更为重要。比较好的工具有proteome-yst (个人感觉较准的,但是有些蛋白预测不出来),ptarget,wolfpsort,nucleo针对核定位,targetp。不同工具特性也不太一样。可以参考一下工具的发表时间和发表杂志的分量,然后把各种工具的结果综合一下。
原理:构建编码目bai标蛋白和荧光蛋du白的融合蛋白的载体,转染细胞,表zhi达,然后激光共-显微镜dao观察荧光信号所在位置,即可知道该蛋白的亚细胞定位。注意-载荧光蛋白的对照。
具体步骤:构建目标蛋白与gfp的融合蛋白的瞬时表达载体,基因枪轰击洋葱内表皮细胞,或化学peg转化原生质体,瞬时表达后用荧光显微镜观察荧光位置,当然激光共-图片会更漂亮。
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