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样品的固定步骤是为了保持样品的原有形态学。样品固定是原位杂交中必不可少的步骤，从化学反应角度来看，固定剂的使用和选择对后续杂交的影响不会太大，因为-杂交的功能分子基团被-包裹在dna双螺旋结构中，而交联剂的使用对rna基本没有影响。

内源性酶灭活：如果探针的检测是通过酶促法进行的，则样品内相应的内源性酶必须被灭活。如内源性的pod可通过含1% h2o2的-处理30min。

探针标记。市售的探针盒子花样繁多，尽量选择-的试剂盒。严格按照其操作步骤和条件进行。不同厂家的盒子中使用的酶存在差异，因此这一步操作需要根据实际情况操作。

杂交液滴到组织上后不要太用力掀开盖玻片，而是在漂洗的时候采用滴管在其侧面滴洗，轻轻冲下盖玻片。这一步是很有-的！而在封片时，一定要密封好玻片，可以采用凝胶类的物质封住四周。